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  • 分享!核酸凝胶染料的染色方案
  • 点击次数:1455 更新时间:2022-11-28
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  •   核酸凝胶染料是可用于检测琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中双链DNA(dsDNA)的灵敏的染料之一。由于核酸凝胶染料对dsDNA具有更高的灵敏度,因此其特别适合用于存在污染性RNA或ssDNA可能模糊测定结果的检测。核酸凝胶染料具有极低的背景荧光,其光谱特性与现有仪器中的光源和滤光镜套件非常匹配,这使其成为与激光扫描仪配合使用的理想选择。
     
      核酸凝胶染料染色方案:
      我们发现通过后染色实现了最大的灵敏度,这也消除了核酸凝胶染料干扰DNA迁移的可能性。虽然预制方案更方便,但一些DNA样本可能会出现迁移,强烈建议凝胶运行时间不超过2小时。建议使用以下方案。可能需要进行一些比较以确定哪一个更符合您的需求。
      1、后染色方案:
      ①根据您的标准方案运行凝胶;
      ②通过将10000X储备试剂稀释到PH 7.5-8缓冲液中制备1X Cyber Green工作溶液;
      ③将凝胶放入合适的聚丙烯容器中。轻轻加入足量的1X染色溶液浸没凝胶;
      ④在室温下轻轻搅拌凝胶约30分钟,避光;
      ⑤使用254nm透射仪或使用长路绿色滤光片(如SYBR滤光片或GelStar滤光片)的激光凝胶扫描仪对染色的凝胶成像。
     
      2、预染色方案:
      ①使用标准方案制备琼脂糖凝胶溶液;
      ②在浇注凝胶前将10000X Cyber Green原液试剂以1:10000稀释到凝胶溶液中并充分混合;
      ③根据您的标准方案运行凝胶;
      ④使用254nm透射仪或使用长路径绿色滤光片的激光凝胶扫描仪对染色的凝胶成像。
     
      3、电泳前的DNA染色:
      ①在电泳前,用1:10000稀释的染料(TE,TBE或TAE)孵育DNA至少15分钟。
      ②根据您的标准方案运行凝胶。
      ③使用254nm透射仪或使用长路绿色滤光片(如SYBR滤光片或GelStar滤光片)的激光凝胶扫描仪对染色的凝胶成像。
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