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  • PEI转染试剂在日常使用上需注意以下四点
  • 点击次数:9205 更新时间:2021-01-26
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  •   PEI转染试剂由纳米高分子聚合物组成,分子内含有许多氨基,在生理PH下会发生质子化,这些质子化的氨基可以中和DNA质粒表面的负电荷,使DNA分子由伸展结枸压缩为体积相对较小的DNA粒子,并包包裹在其中,使DNA免受核破醇的降解。转染复合物主要是通过细胞内吞作用将DNA转移进入细跑,形成内合体,DNA从内会体释放,进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。通过纳米技术生产出的PEI转染试剂在纳米尺度表现出结合保护DNA能力强、毒性低的*性能。
     
      PEI转染试剂的注意事项:
      1、质粒质量:请务必使用高纯度无内毒素转染级质粒。通过260nm光吸收测定DNA 浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
      2、细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。
      3、细胞培养液要求:PEI转染试剂可用于有血清培养基的转染,并且转染前不需要换培养基。但是,制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。确保细胞培养液没有被细菌、真菌或支原体污染。转染时培养液中不添加抗生素。
      4、DNA浓度和PEI转染试剂量的优化:DNA浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响,初次使用应优化DNA浓度和转染试剂量以得到大的转染效率。使用者可尝试每 1 μg DNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。DNA和转染试剂的比例,通常推荐是1:2~1:5。
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