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  • 关于PEI转染试剂的使用方法,以下有详细说明
  • 点击次数:20626 更新时间:2021-01-21
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  •   PEI转染试剂其原理是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后,再与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,通过细胞胞吞进入细胞。该产品具有转染效率高,细胞毒性低,操作简单,重复性好,适用范围广等特点。
     
      PEI转染试剂的使用方法:
      1、接种细胞:
      对于贴壁细胞,转染前18-24 h进行铺板(不含抗生素),使其在转染时的密度大约在80%左右。对于悬浮细胞,转染当天,配制EZ Trans-DNA复合物之前进行铺板,每500 µL生长培养基中加入4~8×105cells。
      2、准备EZ Trans-DNA复合物:
      a、对于每孔细胞,将1 μg质粒DNA稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基(或者OPTI-MEMⅠ培养基),混匀。
      b、对于每孔细胞,将3 μL EZ Trans转染试剂稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基(或者OPTI-MEMⅠ培养基),轻轻混匀。
      注:无血清的高糖DMEM培养基是稀释液,不能使用含血清的培养基进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释。因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。
      c、将稀释好的EZ Trans转染试剂尽快全部加入到已稀释好的质粒DNA中,轻轻混匀。
      d、室温放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA复合物。
      
      3、转染细胞:
      a、将上述80 μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡,让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。
      b、在37℃,5% CO2培养箱培养6-18 h,去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液,更换新的培养液,继续培养至对转入基因表达分析。
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