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  • ELISA检测试剂盒的样品收集、处理及保存方法
  • 点击次数:1660 更新时间:2020-05-22
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  •   ELISA检测试剂盒测定的标本十分广泛,体液、分泌物和排泄物等均可作标本以测定,其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定,有些则需经预处理。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。
     
      实验原理实验:
      ELISA检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被微生物柠檬酸合成酶(CS)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的微生物柠檬酸合成酶(CS)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
     
      样品收集、处理及保存方法:
      1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后1000×g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
      2、血浆:用EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
      3、细胞上清液 1000×g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
      4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g 离心10分钟,取上清液。
      5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在 37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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