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  • 介绍细胞膜荧光探针的染色步骤和使用注意事项
  • 点击次数:3324 更新时间:2020-04-27
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  •    细胞膜荧光探针是一种广泛用于检测线粒体膜电位△4 m的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时,细胞膜荧光探针聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,细胞膜荧光探针不能聚集在线粒体的基质中,此时细胞膜荧光探针为单体,可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
      
      线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过细胞膜荧光探针从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以用细胞膜荧光探针从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。单体的Zui大激发波长为 515nm,Zui大发射波长为529nm;聚合物的Zui大激发波长为585nm,Zui大发射波长为590nm 。实际观察时,使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
      
      染色步骤:
      1、于6-,12或24-孔板上进行细胞铺板,密度为5×105 cells/mL。37℃,5%CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。 注:进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL,也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
      2、取0.5 mL细胞悬液至无菌的离心管内。
      3、室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清。
      4、用0.5 mL细胞膜荧光探针工作液重悬细胞,于37℃,5%CO2培养箱孵育15-30 min;注意:一般情况,15 min足以进行充分的染色。
      5、室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清。
      6、用2 mL细胞培养液或者缓冲液重悬细胞,之后室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清。
      7、重复步骤6。
      8、用0.5 mL新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞,即可进行后续的流式分析。
      
      注意事项:
      1、如果一次使用量较小,需把每管再适当进行分装,尽量避免反复冻融。
      2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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