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  • 羧甲基纤维素CM-52 层析填料树脂的在操作上分四个步骤
  • 点击次数:2832 更新时间:2020-04-21
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  •    羧甲基纤维素CM-52 层析填料树脂采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物,表面又用大分子糖链接枝,使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性,它在高流水下保持更高载量,同时又具有更好的分辨率。由于比表面积大,平衡和洗脱的时间也更短。它经过接枝即使是纯化病毒,质粒等超大分子的物质,载量基本保持不变。本产品物理和化学稳定性好,使用寿命长,操作方便。
     
      1、装柱:
      a、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体好做脱气处理。填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
      b、在柱子下端加入 20%乙醇, 以除去柱子中的空气, 关闭柱子出口, 在柱内保留少量的 20%乙醇。 20%乙醇容易产生气泡,可以在里面加 1%吐温避免气泡产生。也可以换成纯水装柱子,但是需要把填料中的 20%乙醇也换成纯水,具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行,也可以小心倾去填料上的 20%乙醇,再换成 5 倍体积的纯水,反复沉淀去上清,5 次左右就可以用于装柱子。
      c、此填料颗粒比较细,所以一定要注意柱子要选择合适的筛网,不能漏,也可以取点填料加到筛网上试试,如果没有问题再将填料连续倒入柱子时,要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产生,让填料先自然沉降到填料体积不再变化,而填料和上面的液体很好分层,上层溶液*澄清,就可以开泵用适当的流速压柱子,填料体积不再变化后,再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于装柱子的流速。
      d、在装柱子前,填料从冰箱中取出至少要室温放置 2-3 个小时,这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
     
      2、蛋白的结合:
      样品的盐浓度和 pH 要尽量和平衡柱子的缓冲液*,盐浓度过高或者 pH 带低也许挂不上,所以要根据自己的样品做适当调整。
     
      3、蛋白的洗脱:
      a、样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。
      b、一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产品。
      c、介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和 pH 值。盐浓度小,介质对样品组分吸附较牢。用 DEAE 介质时,推荐的 pH 值是大于目标产品等电点 1 个单位。
     
      4、再生清洗:
      a、每次用完好用 0.5MNaOH 含 2M NaCl 洗 5 个床体积,再用水洗 5 个柱床体积,然后用 20%乙醇保存, 使用 3-5 次后在水洗之后再用 70%的乙醇或 30%异丙醇都含 1%吐温洗 5 个柱床体积, 后 20%的乙醇流洗 5 个柱床体积。
      b、有机溶剂和水混合很容易产生气泡,为了避免这样情况,可以把配好的有机溶剂在室温放置,再使用,这样可以避免气泡进柱子而导致柱子不能正常使用。
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