Phleomycin腐草霉素 (抗生素)
产品简介:
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 报价(元) |
FS0017-1ML | Phleomycin (20mg/ml) 腐草霉素(20 mg/ml) | 1ml | 900.00 |
FS0017-5ML | Phleomycin (20mg/ml) 腐草霉素(20 mg/ml) | 5×1ml | 3400.00 |
腐草霉素是分子遗传学研究中的选择性抗生素之一,可用于筛选携带Sh ble基因的转染细胞。Sh ble基因来源于Streptoalloteichus hindustanus,其可编码一种14kDa的蛋白,该蛋白可与腐草霉素强烈结合从而抑制其切割DNA链的活性。腐草霉素是由多种结构类似物构成的复合物,这些复合物仅仅在末端胺基有所差异。另外,因属于铜离子螯合的复合物,溶液呈蓝色。
本品以20mg/ml的无菌溶液形式提供,可直接用于细胞培养,在0.1-50μg/ml浓度范围内,腐草霉素可以抑制大多数好氧细胞的生长。
产品属性 Phleomycin腐草霉素(抗生素)
CAS号(CAS NO.) | 11006-33-0 |
分子式(Formula) | C55H85O21N20S2Cu•HCl |
分子量(Molecular weight) | 1525 |
纯度(Purity) | >90%(HLPC) |
结构式(Structure) |
运输与保存方法
冰袋运输。
4°C或-20°C保存。4°C稳定保存12个月,-20°C可稳定保存18个月。避免反复冻融。
Phleomycin腐草霉素(抗生素)操作方法
【注1】细胞对腐草霉素的敏感性受pH值影响,如pH值越高,敏感性越高;另外,对于高渗透压培养基如原生质体再生用的培养基,腐草霉素的活性会明显降低2-3倍。因此也可能通过使用低盐培养基来降低腐草霉素使用量。
【注2】使用前需将低温存放的腐草霉素置于室温回温,之后低速充分混匀。
1大肠杆菌
携带bleomycin抗性基因如Sh ble,Tn5的质粒,一旦转化进入大肠杆菌受体菌如HB101, DH5a, MC1061,赋予其腐草霉素抗性。
腐草霉素抗性的转化子可以在添加5 μg/ml Phleomycin的低盐LB琼脂培养基(Yeast extract 5g/L, Tryptone 10g/L, NaCl 5g/L, Agar 15 g/L, pH 7.5)中进行筛选。加有腐草霉素的平板可于4℃稳定保存1个月。
2酵母菌
酿酒酵母的腐草霉素抗性转化子可在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD培养基中进行筛选。
操作步骤:按常规方法进行酵母细胞转化,一旦DNA进入细胞后,用YEPD培养基稀释细胞并置于摇床上培养6h或过夜,使其抗性性状得以表达。之后将细胞冰浴1h并涂布培养在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD(pH 7.0)固体培养基上。
3真菌
根据转化子对Phleomycin 的敏感性不同,在添加有10-50 μg/ml腐草霉素的再生培养基内进行筛选。先将细胞在4℃孵育过夜然后置于生长温度培养,可提高其对抗生素的敏感性。
4 植物细胞
根据植物类型不同,选择5-25 μg/ml Phleomycin进行转化子筛选。
5 哺乳动物细胞
5-50 μg/ml Phleomycin,推荐先通过建立灭杀曲线来确定浓度。与G418做比较,可能需要更长的时间来杀死细胞或者使细胞从平板上脱落,尤其当细胞处于高密度的情况。
依细胞系不同,通常需要5~21天来挑选具腐草霉素抗性的稳定转染细胞。
注意事项:
1)腐草霉素对浓酸较为敏感,但可短时间暴露于稀酸中。使用前将本品回温至室温,并轻轻混匀。
2)腐草霉素有毒,避免直接接触皮肤,不可吞服。酸性或碱性pH,或次磷酸钠中会即刻失效。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。