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  • CST抗体相关问题解答(二)
  • 点击次数:2502 更新时间:2016-02-21
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  •    之前的《CST抗体相关问题解答(一)》中,我们给大家介绍过几个关于CST抗体的相关问题,本文再给大家说说CST抗体其他的一些疑问。

      1、CST抗体是否适用于全组织样本裂解物?

      答:CST 并未测试所有抗体是否适用于全组织样本裂解物,但是 CST 的很多抗体已经被其他客户用于整个组织而且取得成功。

      2、CST抗体可用于免疫组化吗 ?

      答:检测抗体是否可用于福尔马林固定石蜡包埋样本,是CST 的一项常规检测。那些通过严格验证标准的抗体才会被推荐用作 IHC-P。我们也在新鲜冰冻组织样本上检测抗体,那些染色成功的才会被推荐用作 IHC-F。那些推荐应用里面没有列出 IHC-P 或者 IHC-F 的,可能已经失败,或者没有被检测,或者我们没有用作检测的特别的组织样本。建议你 CST,我们可能有该抗体在其它系统表现良好的数据。或者,我们可能有适用于组织染色的更好的其它产品。

      3、假如说明书上某个种属未被列出与 CST抗体有交叉反应,是否意味着这个种属未被检测过呢?

      答:如果可能的话,CST 科学家检测所有 CST 抗体在人、小鼠和大鼠的交叉反应性。假如我们没有获得某个种属的阳性结果,我们就不会列出这个种属。然而,有可能我们检测的这个细胞系包含一个低水平的特定蛋白,或者,我们使用的操作对于那个特定的细胞系不起作用。因此,我们建议你比较所研究种属和 CST 抗体验证种属修饰位点附近的肽段序列 ( 每边 5 个氨基酸 )。在很多情况下,CST 抗体由免疫人的蛋白序列产生,并通过亲和层析高度纯化。很多时候,如果序列相同,或者在非磷酸化位点只有 1 或者 2 个氨基酸的不同时,CST 抗体很有可能识别你的蛋白。但是,我们不能保证其实验结果。

      4、使用 CST抗体时,为什么我不能使用我自己实验室的 Western blot 操作流程?

      答:CST抗体经过优化以提供zui强的信号、zui少的背景,使用 CST 推荐的Western blot 操作流程,对于终端客户的优点是节约时间和材料。

      5、为什么CST抗体用于 Western blot 效果不佳?

      答:这里有几个关于 CST Western blot 流程的细节,对于避免丢失信号或高背景是非常关键的。

      • 不要过度清洗膜。应在 TBS/0.1% Tween-20 中清洗三次,每次5分钟。过度的清洗会洗掉一抗。推荐的清洗条件已经过优化以获得的信噪比,因此是zui强、zui干净的结果。

      • 不要过度封闭 ( 例如超过 1 小时或者过夜 )。在一些抗体中发现,过度封闭会减少特异信号。确保查阅每个产品的说明书以得到每个抗体推荐的封闭时间。

      • 一般来说,针对兔多抗或兔单抗,使用抗兔二抗:#7074;针对鼠单抗,使用抗鼠二抗:#7076。

      • 确认抗体的说明书上交叉反应部分有列出你所检测的种属。

      • 确认你的上样量达到 20 μg 细胞裂解液。

      • 确认诱导的细胞裂解液样本蛋白已活化。

      如果您对于CST抗体还有其他的疑问,咨询,我们竭诚为您解答。

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