PCR是利用一段DNA为模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下,将该段DNA扩增至足够数量,以便进行结构和功能分析。PCR医学检测方法在临床上快速诊断细菌性传染病等方面具有极为重要的意义。
PCR原理用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段,类似于天然DNA的复制过程。以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5’末端和3’末端互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA片段得到扩增。
PCR医学检测先根据试剂盒说明书样本要求,进行标本采集,常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。获得患者样本后需尽快进行检测,如无法立即检测需要转运的样本,应按照说明书的要求进行低温封存,并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后会对样本进行核酸提取。核酸提取试剂应使用批准的、产品说明书中的核酸提取试剂盒,病毒RNA先需要转转录为cDNA,再进行扩张检测。PCR检测应使用批准产品说明书中的荧光定量PCR仪,通过荧光定量PCR所得到的样本CT值的大小,可以判断患者样本中是否含有的病毒。