磁珠是发展起来的一项新的免疫学技术,它将固化试剂*的优点与免疫学反应的高度特异性结合于一体,以免疫学为基础,渗透到病理、生理、药理、微生物、生化以及分子遗传学等各个领域,其在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化和分子生物学等方面得到了越来越广泛的应用。
技术应用:
用MACS 细胞分选系统可以分离出非常纯的细胞群体,而且有较好的回收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同,MACS分离细胞的纯度可达95%-99.9%,回收率>90%。
分离原理:
免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。
应用方法:
免疫磁珠应用分为正选法和负选法:
正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞;
负选法-磁珠结合不需要的细胞,游离于上清液的细胞为所需细胞;
一般而言,负选法比正选法的磁珠用量大。
磁珠大小在0.1-0.45mm 包被了生产的高质量单抗磁珠已为白细胞亚群的分选所优化 将包被了特异性单抗的BD IMag磁珠加入细胞悬液,磁珠特异性地与有相应抗原的细胞亚群结合,通过分离得到的连有磁珠的细胞可直接用于功能试验和用流式细胞仪检测。
磁分离细胞的重要指标是:
纯度和得率,这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小(磁性),然而太小的磁珠得率不高,太大的磁珠又会影响细胞活性,也无法直接上流式。