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  • 谈谈组织细胞固定液常见的固定方法有哪几种
  • 点击次数:394 发布时间:2016/11/11
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  • 组织细胞中的大多数肽类激素、蛋白物质为水溶性,在进行病理研究之前必需固定。多聚甲醛能很好地保存组织的抗原性和细微结构,与福尔马林相比更适用于小动物组织标本的固定,也非常适合组织和细胞的光镜病理或免疫化学研究。组织细胞固定液为4%多聚甲醛的缓冲溶液,pH为中性。用于组织和细胞标本的固定。.
     
    组织细胞固定液固定方法有物理固定和化学固定两类,物理固定可采用空气干燥(血涂片)、骤冷(在液氮中迅速冷冻)或微波固定等;化学固定有浸润法(immersion method)和灌流法(perfusion method)。灌流法适用于动物实验中对缺氧敏感的器官,如神经系统和胃肠等取材。
     
    组织细胞固定液固定的方法 
        1.浸泡法 
    这是最常用的固定法,将取好的组织直接浸泡在固定液中,固定的时间一般在2~24h它适用于动物标本、尸检标本及临床活检标本等。 
        2.蒸气法 
        比较小而薄的标本可用锇酸或甲醛蒸气固定。主要用于血液、细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。具体方法:在一有盖培养皿内滴人1%一2%锇酸水溶液3滴,将涂片放人其中,固定30s至lmin左右,立即水洗后进行染色。 
        3.注射、灌注固定法 
        主要适用于动物实验标本的固定。将固定液注入血管,以达到充分的固定。经血管分支到达整个组织或全身 
    (1)局部灌注固定 固定肺组织可将固定液从气管或支气管注入,注入速度不要太快,用力均匀,注入量适当,以免胀破肺泡。固定眼球组织可从眼后房注人固定液。固定肝、肾组织则可从肝、肾动脉注入固定液,同时切断其静脉使得血液排出。脑组织的固定,必须先麻醉动物,分离颈动脉,注射器的针尖向着头部的方向注入固定液。 
    (2)全身灌注固定 较大的动物往往采取输液方法,将固定液从一侧颈总动脉或股动脉输入,将另一侧相应的静脉切开放血。固定液的输入量因动物而异,兔、猫约500~1000ml,猴、狗约1000—2000ml。 
        4.微波固定法 
    近几年来微波固定法一直可见报道。经微波固定的组织具有收缩较小、核膜清晰、染色质均匀、分辨清晰等特点,但必须严格控制微波固定的时间和温度。
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